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動物血清常見問題

【發布日期】2020-05-13 【瀏覽次數】2895次
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  血清是細胞培養中最重要的元素之一。在實驗室操作中要注意及處理方法:

1. 血清保存: 建議血清應保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放於4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。

2. 解凍血清的方法: 建議您將血清從冷凍箱取出後,先置於2~8℃冰箱使之融解,然後在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。

3. 血清解凍後發現有絮狀沉澱物出現,該如何處理?血清中沉澱物的出現有許多種原因,但最普遍的原因是由於血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍後,也會存在於血清中,亦是造成沉澱物的主要原因之一。但這些絮狀沉澱物,並不影響血清本身的質量。若您欲去除這些絮狀沉澱物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。成版人app直播不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉澱物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。

4. 為什麽要熱滅活血清?加熱可以滅活補體係統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

5. 有必要做熱滅活嗎?實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長隻有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉澱物的形成會顯著的增多,這些沉澱物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受汙染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉澱物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此成版人app直播建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節省您寶貴的時間,更確保血清的質量!

6. 為什麽儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉澱?胎牛血清沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉澱或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反複凍融。

7. 如何避免沉澱物的產生?解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉澱物。解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉澱的發生。請勿將血清置於37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鍾的原則,並且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉澱物的增加.